| 1. |
Togliere la parte esterna del tartufo che
essendo stata a contatto con il terreno puņ essere contaminata con DNA di altri organismi |
| 2. |
Triturare pochi grammi dell'ascocarpo in
una provetta |
| 3. |
Eseguire la lisi delle cellule con il
metodo CTAB |
| 4. |
Centrifugare e raccogliere il
sovranatante contenente il DNA genomico |
| 5. |
Purificare il DNA con fenolo-cloroformio
e precipitazione in etanolo |
| 6. |
Risospendere il DNA in pochi ul di
tampone |
| 7. |
Eseguire una PCR
usando il DNA estratto come templato ed il primers universali per le sequenze ITS |
| 8. |
Eseguire tre restrizioni
enzimatiche con i seguenti enzimi: EcoRI, HincII, NspI |
| 9. |
Caricare i prodotti delle reazioni di
restrizione su gel di agarosio al 4% ed eseguire una elettroforesi
di due ore a 10 V/cm |
| 10. |
Colorare il gel con bromuro di etidio per
visualizzare le bande |
Procedura sperimentale