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Gli enzimi di restrizione sono delle endonucleasi che catalizzano la scissione di entrambi i filamenti di DNA in corrispondenza di una specifica sequenza nucleotidica. Molti enzimi di restrizione sono omodimeri e riconoscono sequenze palindromiche di DNA. La reazione di rottura del legame fosfodiesterico richiede la presenza di uno ione divalente ma non richiede ATP. A secondo del tipo di enzima, la scissione del doppio filamento di DNA produce estremità piatte (blunt ends) o protrusive (steaky ends). (Data una sequenza di DNA è possibile ottenere un profilo di restrizione teorico con il programma RestMap accessibile in internet.) Alcuni esempi di palindromi riconosciute da endonucleasi:
Struttura di una delle due subunità identiche di EcoRI in complesso con il DNA substrato (McClarin et al. Science 1986 234:1526-1541).
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